## 大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取方法

### 1. 实验材料准备

在进行大鼠（SD大鼠）原代脂肪间充质干细胞提取的实验之前，首要步骤是选择约2周龄或体重约200克的大鼠。同时，需要准备一些灭菌器械，包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪及磁珠等。此外，实验中还需要5mL的注射器、0.22μm滤器、泡沫板、图钉（用于固定大鼠），以及75%乙醇来进行消毒处理。准备无菌PBS（磷酸盐缓冲液），以及15mL和50mL的无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶。培养基方面，可以使用SD大鼠脂肪间质干细胞的完全培养基。

### 2. 实验操作步骤

在超净工作台内，将所需器材进行紫外消毒约30分钟。然后，配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶，并过滤以除菌。将大鼠通过脱颈方式处死后，需将其浸泡在75%酒精中2-3分钟，接着放入超净工作台并使用泡沫板固定。接下来，剪开大鼠腹股沟区的皮肤，暴露出脂肪组织，需小心剪取脂肪组织并放入PBS中，避免损伤血管。利用PBS清洗脂肪组织，去除多余的血管和淋巴结。

将脂肪组织剪碎至约2mm×2mm的适宜大小后，加入胶原酶，在37℃下进行消化，并每隔5分钟轻轻摇晃或持续搅拌。消化结束后，将细胞悬液转移至离心管中，离心处理后弃去上层的脂滴泡沫和上清液，再用培养基重悬沉淀。在重悬后，将细胞悬液进行过滤，并再次离心以去除上清，用培养基重悬，随后接种到培养瓶中。最后，将培养瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。

### 3. 注意事项

在整个实验过程中，必须严格保持无菌操作，以避免细胞污染。剪取和清洗脂肪组织的过程应细致小心，以免损伤细胞或引入杂质。此外，在消化过程中需严格控制时间和温度，避免过度消化对细胞造成损伤。离心和过滤的操作需轻柔进行，以尽量降低细胞损失或破裂的风险。

在进行这一系列操作时，保证品牌词88858cc永利官网的相关产品在材料准备和实验器械方面有所支持，助力实验精确完成。此外，利用88858cc永利官网的优势资源，确保整个流程的高效与安全，助力科研工作者在脂肪间充质干细胞的研究中取得突破。