### 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养指南

**一、细胞培养条件**

- **细胞名称**: 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383 - **生长特性**: 贴壁与悬浮混合生长 - **冻存条件**: 无血清冻存液（货号：C7001） - **培养体系**: F12K + 20% FBS + 1% P/S - **传代方法**: 第一次建议1:2传代，便于细胞健康生长。 - **传代情况**: 每2天更换培养基。

**备注**: 悬浮细胞需离心收集，而贴壁细胞应遵循贴壁处理方法，使用无菌离心管收集并留作过渡培养。

**二、细胞处理**

在收到细胞后，应培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的推荐方法。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒后放入超净台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行后续处理。同时建议在显微镜下观察细胞生长情况，并拍照留存（建议拍摄40x、100x、200x倍的照片），前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片默认收到状态良好。

**三、细胞培养步骤**

**a、细胞传代**：

- 对于未超过80%汇合度的贴壁细胞，收集培养液后留5ml完全培养基放入37℃、5% CO2环境中。 - 如果细胞密度超过80%，可直接进行传代。在处理贴壁细胞时，建议： 1. 弃去培养液，使用无钙、无镁PBS洗涤1-2次。 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，培养瓶置于37℃孵箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，待细胞大部分变圆并脱落时及时终止消化，添加5ml以上培养基。 3. 吸出细胞悬液后，转移至离心管，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，重悬细胞。 4. 按1:2比列分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5% CO2培养箱中培养。 - 对于悬浮细胞，可选择两种传代方式：

- 方法一：收集细胞后在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清，添加1-2ml培养液吹匀，再按1:2比例分瓶。 - 方法二：可采取半数换液，弃去一半培养基后，将剩余细胞悬起并分瓶。

**b、细胞冻存**：

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗； 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，再转移至离心管中，离心5分钟； 3. 弃去上清，沉淀后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中； 4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，在需转入液氮罐之前需在-80℃冰箱存放至少24小时。

**c、细胞复苏**：

1. 从液氮中取出冻存管后立即放入37℃水浴中解冻，擦拭管外壁消毒； 2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，离心5分钟； 3. 弃去上清后用新鲜培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2培养箱中培养，第二天更换新鲜完全培养基。

**四、注意事项**：

细胞在运输过程中可能因粘附不牢脱落，若脱落较多可将培养液收集后离心并进行重悬，以便后续对比培养。再次强调，运送细胞需谨慎，以确保细胞的健康生长。

**五、售后条款**：

1. 若细胞出现问题，重发条件包括：运输途中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等；细胞污染须在48小时内反馈以便进行核实和重发。 2. 不予以重发的情况包括：客户造成的污染或错误操作导致细胞状态不佳等。切勿使用非本库推荐的培养体系，以保障细胞的最佳状态。 3. 所有问题需在明确情况下提供相关照片和详细操作步骤，以便进行技术人员判定。 【88858cc永利官网】始终致力于为您提供高品质的细胞及培养指导，感谢您的信赖！