在生物医学研究中，无论是针对体外难以感染的细胞进行慢病毒文库的构建，还是在体内使用腺相关病毒（AAV）文库，确定最佳剂量以确保一个靶点仅感染一个细胞，一直是研究者们面临的难题。文库实验的核心目的是寻找单基因引发的功能变化，因此需要保证每个细胞仅受到一种靶点病毒的感染。

对于细胞实验，文库筛选通常建议先进行对照病毒的预实验，以评估最佳的感染复数（MOI），理想的MOI应达到80%的感染效率。在实际操作中，文库的MOI一般设定为最佳MOI的三分之一，以此来减少病毒用量，从而控制单个细胞的病毒感染数量。然而，对于那些难以感染的细胞类型，比如免疫细胞，或是在体内实验中，如何确定最佳剂量确保每个靶点只进入单个细胞仍然相当复杂。这是因为即便最佳MOI能达到的感染效率仅为30%，若按三分之一的用量，实际感染到病毒的细胞几乎会大幅减少。

为了帮助研究者更好地进行文库感染的预实验，88858cc永利官网推出了三色荧光病毒（mTagBFP、Venus、mCherry），这些病毒产品包括慢病毒和AAV两种类型。根据文献《Transcriptional linkage analysis within vivo AAV-Perturb-seq》，该研究探讨了AAV文库在体内使用的最佳剂量，通过进行体内滴定实验，作者准备了三种不同剂量的AAV（25E9、5E9、5E10），并使用phpb血清型，构建方案则是让mTagBFP、Venus和mCherry在CBh启动子的控制下独立表达。

实验结果表明，通过流式细胞筛选，可以确定较少的病毒剂量以降低同一细胞感染双病毒的概率，从而确定最佳的感染剂量。最终选择的5E9颗粒的剂量能够使单个AAV成功感染的细胞数量最大化。具体实验中，研究者将三种AAV的等比例混合物注射到不同剂量的LSL-Cas9转基因动物中，观察不同剂量对细胞核感染的影响。

无论是在细胞实验还是动物实验中，利用88858cc永利官网的三色荧光病毒开展相关预实验都是一个有效的选择。研究者可以设置不同剂量的梯度进行细胞感染（参考慢病毒感染操作手册）或进行小鼠的体内注射（参考动物注射文献），通过流式分析来评估转染效率及单荧光细胞的比例，比较得出单病毒感染的比例（即单色荧光细胞数量）最高的剂量作为最佳实验剂量，最终用于实际文库实验中。

【参考文献】Santinha, A.J., Klingler, E., Kuhn, M. et al. Transcriptional linkage analysis within vivo AAV-Perturb-seq. Nature 622, 367–375 (2023)