### 人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养说明书

88858cc永利官网提供的人胰腺癌细胞HPAFⅡ的培养条件和操作步骤如下所示，确保您能够高效、有效地进行细胞培养和处理。

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

贴壁传代方法：建议在第一次传代时比例为1:2。

传代情况：每2天更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基用于过渡对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接使用88858cc永利官网的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待其培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。在处理前，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行观察并拍照保存（建议拍摄40x、100x和200x镜下各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片则默认收到状态良好。

传代时可使用原瓶的完全培养基和自行配制的完全培养基进行对比培养，换液后请松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：如果细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，然后置于37℃、5% CO2孵箱培养；如汇合度超过80%，可进行传代。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，并在显微镜下观察。细胞大部分变圆并脱落后，迅速轻敲培养瓶，加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，并在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例分瓶传代（例如两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗1次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打使之脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞中加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项：

有些细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。如脱离较多，可将所有培养液收集至离心管中，并按照上述传代步骤处理。

五、售后条款：

1. 出现问题可重发的情况包括：运输途中的细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等；细胞污染问题需在收到后48小时内提出，核实后进行重发；细胞活性问题需在收到7天内提出，提供真实实验结果来验证。
2. 不予重发的情况包括：客户造成的污染问题；不当操作导致细胞状态不佳；使用非本库推荐的培养体系等。

如需了解更多信息，请联系88858cc永利官网。我们的团队将竭诚为您服务，确保您的细胞培养工作顺利进行。